姜黄素对H2O2诱导的HT29细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

doi:10.16333/j.1001-6880.2019.3.005

天然产物研究与开发 ›› 2019, Vol. 31 ›› Issue (3): 401-407.doi: 10.16333/j.1001-6880.2019.3.005

姜黄素对H₂O₂诱导的HT29细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

钟宇，黄琼林，莫明明，杨青锦，蔡春*

广东医科大学分析中心，湛江 524023

出版日期:2019-04-02 发布日期:2019-04-02
基金资助:
国家自然科学基金（21375029）；湛江市科技攻关计划（2015B01025）；广东省医学科研基金（A2017005，B2017044）；广东医科大学科研基金面上培育项目（M2016021）；广东省中医药局项目（20182072）

Protective effects and mechanism of curcumin against H₂O₂-induced oxidative injury on HT29 cells

ZHONG Yu,HUANG Qiong-lin,MO Ming-ming,YANG Qing-jin,CAI Chun*

Analysis center,Guangdong Medical University, Zhanjiang 524023,China

Online:2019-04-02 Published:2019-04-02

摘要/Abstract

摘要： 研究姜黄素对H₂O₂诱导HT29细胞氧化应激的保护作用及其可能的分子机制。分别采用低、中、高浓度姜黄素处理H₂O₂诱导的HT29细胞氧化损伤模型，并设置H₂O₂模型组和正常对照组； MTT法确定H₂O₂最佳损伤浓度和时间及姜黄素（2.5、5、10 μmol/L）对H₂O₂诱导的HT29细胞活性的影响； AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况； PI染色流式细胞术检测细胞周期变化；DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）；JC-1染色检测细胞线粒体膜电位；比色法测定乳酸脱氢酶（LDH）释放量，以及丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、caspase-3和caspase-9的水平。结果显示姜黄素组（2.5、5、10 μmol/L）明显提高H₂O₂诱导的HT29细胞的存活率（P<0.05，P<0.01）；与H₂O₂模型组相比，姜黄素组细胞凋亡率降低（P<0.01），增殖指数增高（P<0.05，P<0.01），LDH释放量和细胞内ROS降低(P<0.05，P<0.01)，线粒体膜电位上升(P<0.01)，SOD活力增加（P<0.01）， MDA降低（P<0.01），caspase-3和caspase-9活性增强（P<0.01），并呈剂量-效应关系。结果表明姜黄素在一定剂量范围内对H₂O₂诱导的HT29细胞氧化损伤具有较好的保护作用，该作用可能与清除ROS，减轻 DNA 氧化损伤，抑制线粒体通路介导的细胞凋亡有关。

关键词: 姜黄素, H₂O₂, HT29细胞, 氧化应激

Abstract: To investigate the protective effects and potential mechanism of curcumin against H₂O₂-induced oxidative injury in HT29 Cells.A model of H₂O₂-induced injury in HT29 Cells was successfully established.Cells were divided into control group,model group,curcumin ((low,medium and high concentrations)groups.The optimal damage concentration and time of H₂O₂,and the effect of curcumin (2.5,5,10 μmol/L) on the activity of H₂O₂-induced HT29 cells were determined by MTT assay.The apoptotic rate of HT29 cells was detected by Annexin V/ Propidium iodide staining.HT29 cell cycle alteration was analyzed by Propidium iodide staining.ROS production was assessed by DCFH-DA fluorescence.Mitochondria membrane potential was determined by JC-1 staining.The activities of malondialdelyde (MDA),superoxide dismutase (SOD),caspase-9 and caspase-3 were measured by the spectrophotometric method.Compared with H₂O₂model group,the cell in Curcumin groups exhibited significantly increased viability (P<0.05,P<0.01),decreased apoptosis index (P<0.01),increased proliferation index (P<0.05,P<0.01),decreased intracellular ROS (P<0.05,P<0.01),increased mitochondrial membrane potential (P<0.01),and enhanced caspase-9 and caspase-3 activity (P<0.01).In addition,curcumin groups reduced LDH leakage(P<0.05,P<0.01),inhibited MDA formation(P<0.01) and increased SOD levels(P<0.01).Curcumin has favorable protective effect on H₂O₂-induced HT29 cell injury in a certain dose range,which may be related to scavenging ROS,alleviating DNA oxidative damage and inhibiting mitochondrial pathway-mediated apoptosis.

Key words: curcumin, H₂O₂, HT29 cell, oxidative stress

中图分类号:

R285.5 R961

钟宇，黄琼林，莫明明，杨青锦，蔡春*. 姜黄素对H₂O₂诱导的HT29细胞氧化损伤的保护作用及机制研究[J]. 天然产物研究与开发, 2019, 31(3): 401-407.

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姜黄素对H₂O₂诱导的HT29细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

Protective effects and mechanism of curcumin against H₂O₂-induced oxidative injury on HT29 cells

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