摘要:
运用网络药理学探究海巴戟治疗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的机制及实验验证研究。利用CMAUP、TCMSP、SwissADME数据库检索并筛选海巴戟的活性成分,分别在GeneCards、OMIM、TTD、PharmGKB及Drugbank数据库中设置筛选条件检索去重后得到AS靶点。通过STRING数据库构建蛋白互作网络(PPI),采用R语言对交集靶点进行GO和KEGG富集分析。构建THP-1源性巨噬细胞模型进行体外实验验证,通过CCK-8实验筛选海巴戟给药浓度,采用油红O染色和22-NBD-Cholesterol细胞荧光方法检测海巴戟干预后模型细胞内胆固醇含量的变化,再使用RT-PCR、WB实验检测和验证所预测的信号通路。结果显示从海巴戟中共筛选出活性成分59个,靶点332个,参与治疗AS的交集靶点154个,包括PPARG、MMP9、IL-6、CCL2等;GO富集分析得到2 844个条目,前10个条目主要包括调节细胞膜受体与核受体等生物学功能,KEGG富集分析得到182个条目,前20个条目主要包括脂质代谢与动脉粥样硬化、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路等。在验证实验中,首先利用CCK-8实验筛选出了合适的海巴戟浓度(10、20、40 μg/mL),油红O染色和22-NBD-Cholesterol细胞荧光结果显示海巴戟可促进THP-1源性巨噬细胞内胆固醇流出,且呈剂量依赖性;RT-PCR、WB结果显示海巴戟可激活PPARγ信号通路,增加PPARγ和ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)的表达。GW9662阻断PPARγ信号通路后海巴戟促进THP-1源性巨噬细胞内胆固醇的流出能力下降,且PPARγ和ABCA1表达随之下调。因此,运用网络药理学结合实验验证揭示海巴戟可能通过激活PPARγ信号通路促进THP-1源性巨噬细胞胆固醇的流出而改善AS。
中图分类号:
285.5
张 哲, 王 蓓, 唐根云, 饶利兵, 林 玲. 基于网络药理学和实验验证探讨海巴戟抗动脉粥样硬化的作用机制[J]. 天然产物研究与开发, 2023, 35(11): 1977-1990.
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